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熒光光譜微檢測(cè)技術(shù)

       檢測(cè)系統(tǒng)是芯片系統(tǒng)研究的關(guān)鍵之一。檢測(cè)器的總體性能將影響整個(gè)微流控芯片分析系統(tǒng)的檢出限、檢測(cè)速度、適用范圍以及體積等指標(biāo),是微流控芯片分析系統(tǒng)的一個(gè)關(guān)鍵部分。因此有關(guān)檢測(cè)器和檢測(cè)方法的研究已經(jīng)成為微流控芯片領(lǐng)域的一個(gè)重點(diǎn)和熱點(diǎn)。在眾多的檢測(cè)方法中,光譜檢測(cè)由于其具有良好的選擇性、較寬的線性范圍、微量定性定量分析和非破壞性檢測(cè)等特點(diǎn),已逐漸成為該領(lǐng)域研究中應(yīng)用最廣泛,靈敏度最高的檢測(cè)技術(shù)之一。光譜微檢測(cè)技術(shù)是微全分析系統(tǒng)芯片(如:微流控生物PCR 芯片、微流控微分析化學(xué)芯片和毛細(xì)管電泳微分析芯片等)的核心技術(shù)之一。

      

       目前國(guó)內(nèi)外普遍使用的、基于熒光能量傳遞技術(shù)的熒光定量PCR技術(shù)有:TaqMan 技術(shù)、Amplisensor 技術(shù)、Molecular beacon 技術(shù)(分子信標(biāo))、Lightcycler 技術(shù)和Complexprobes 技術(shù)(復(fù)合探針法)。通過對(duì)上述幾種PCR 定量技術(shù)的分子生物學(xué)理論和技術(shù)特征分析,可以做出這樣的診斷:盡管上述幾種PCR 定量技術(shù)在生物工程技術(shù)層面上的原方法各不相同,但它們的熒光發(fā)光機(jī)理以及發(fā)光目的都是破壞兩個(gè)熒光分子間的FRET,從而發(fā)出熒光,熒光強(qiáng)度與溶液中模板量成正比,根據(jù)熒光強(qiáng)度以及強(qiáng)度相對(duì)變化的信息,可對(duì)PCR 產(chǎn)物進(jìn)行定性定量分析。因此,以量值溯源的要求對(duì)PCR 定性、定量分析的熒光檢測(cè)進(jìn)行研究,將從根本上提高PCR 定量技術(shù)的精確性和可靠性。根據(jù)光學(xué)原理的不同,光譜檢測(cè)課細(xì)分為熒光檢測(cè),吸收光度檢測(cè)和電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)。熒光檢測(cè)由于具有高靈敏度,高檢測(cè)范圍和可容易實(shí)現(xiàn)等諸多優(yōu)點(diǎn),被廣泛采用。熒光基團(tuán)通常各自擁有單一的光吸收峰,在光的刺激下,熒光基團(tuán)吸收光的能量后通常以三種方式釋放能量,見圖(3,4,5)。
 

1:光能:許多熒光基團(tuán)吸收光能以后仍舊以光能形式釋放能量,并且發(fā)射光的峰值大于吸收峰。
2:熱能:某些熒光基團(tuán)吸收光能后,能量轉(zhuǎn)換為熱量擴(kuò)散到環(huán)境中。
3:轉(zhuǎn)移給臨近的分子:當(dāng)臨近的分子滿足發(fā)生能量轉(zhuǎn)移的要求時(shí),能量從熒光基團(tuán)傳遞到臨近的分子。熒光標(biāo)記基團(tuán)在某波長(zhǎng)的激發(fā)光刺激下,產(chǎn)生一個(gè)更長(zhǎng)波長(zhǎng)的發(fā)射光。

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標(biāo)簽:  熒光光譜 微檢測(cè)技術(shù) 生物芯片
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