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熒光光譜微檢測技術

       檢測系統是芯片系統研究的關鍵之一。檢測器的總體性能將影響整個微流控芯片分析系統的檢出限、檢測速度、適用范圍以及體積等指標,是微流控芯片分析系統的一個關鍵部分。因此有關檢測器和檢測方法的研究已經成為微流控芯片領域的一個重點和熱點。在眾多的檢測方法中,光譜檢測由于其具有良好的選擇性、較寬的線性范圍、微量定性定量分析和非破壞性檢測等特點,已逐漸成為該領域研究中應用最廣泛,靈敏度最高的檢測技術之一。光譜微檢測技術是微全分析系統芯片(如:微流控生物PCR 芯片、微流控微分析化學芯片和毛細管電泳微分析芯片等)的核心技術之一。

      

       目前國內外普遍使用的、基于熒光能量傳遞技術的熒光定量PCR技術有:TaqMan 技術、Amplisensor 技術、Molecular beacon 技術(分子信標)、Lightcycler 技術和Complexprobes 技術(復合探針法)。通過對上述幾種PCR 定量技術的分子生物學理論和技術特征分析,可以做出這樣的診斷:盡管上述幾種PCR 定量技術在生物工程技術層面上的原方法各不相同,但它們的熒光發光機理以及發光目的都是破壞兩個熒光分子間的FRET,從而發出熒光,熒光強度與溶液中模板量成正比,根據熒光強度以及強度相對變化的信息,可對PCR 產物進行定性定量分析。因此,以量值溯源的要求對PCR 定性、定量分析的熒光檢測進行研究,將從根本上提高PCR 定量技術的精確性和可靠性。根據光學原理的不同,光譜檢測課細分為熒光檢測,吸收光度檢測和電化學發光檢測。熒光檢測由于具有高靈敏度,高檢測范圍和可容易實現等諸多優點,被廣泛采用。熒光基團通常各自擁有單一的光吸收峰,在光的刺激下,熒光基團吸收光的能量后通常以三種方式釋放能量,見圖(3,4,5)。
 

1:光能:許多熒光基團吸收光能以后仍舊以光能形式釋放能量,并且發射光的峰值大于吸收峰。
2:熱能:某些熒光基團吸收光能后,能量轉換為熱量擴散到環境中。
3:轉移給臨近的分子:當臨近的分子滿足發生能量轉移的要求時,能量從熒光基團傳遞到臨近的分子。熒光標記基團在某波長的激發光刺激下,產生一個更長波長的發射光。

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