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基因芯片的測序原理

       基因芯片又稱為DNA微陣列(DNA microarray),可分為三種主要類型:

       1)固定在聚合物基片(尼龍膜,硝酸纖維膜等)表面上的核酸探針或cDNA片段,通常用同位素標記的靶基因與其雜交,通過放射顯影技術進行檢測。這種方法的優點是所需檢測設備與目前分子生物學所用的放射顯影技術相一致,相對比較成熟。但芯片上探針密度不高,樣品和試劑的需求量大,定量檢測存在較多問題 。

       2)用點樣法固定在玻璃板上的DNA探針陣列,通過與熒光標記的靶基因雜交進行檢測。這種方法點陣密度可有較大的提高,各個探針在表面上的結合量也比較一致,但在標準化和批量化生產方面仍有不易克服的困難。

       3)在玻璃等硬質表面上直接合成的寡核苷酸探針陣列,與熒光標記的靶基因雜交進行檢測。該方法把微電子光刻技術與DNA化學合成技術相結合,可以使基因芯片的探針密度大大提高,減少試劑的用量,實現標準化和批量化大規模生產,有著十分重要的發展潛力。

       它是在基因探針的基礎上研制出的,所謂基因探針只是一段人工合成的堿基序列,在探針上連接一些基因芯片可檢測的物質,根據堿基互補的原理,利用基因探針到基因混合物中識別特定基因。它將大量探針分子固定于支持物上,然后與標記的樣品進行雜交,通過檢測雜交信號的強度及分布來進行分析。基因芯片通過應用平面微細加工技術和超分子自組裝技術,把大量分子檢測單元集成在一個微小的固體基片表面,可同時對大量的核酸和蛋白質等生物分子實現高效、快速、低成本的檢測和分析。由于尚未形成主流技術,生物芯片的形式非常多,以基質材料分,有尼龍膜、玻璃片、塑料、硅膠晶片、微型磁珠等;以所檢測的生物信號種類分,有核酸、蛋白質、生物組織碎片甚至完整的活細胞;按工作原理分類,有雜交型、合成型、連接型、親和識別型等。由于生物芯片概念是隨著人類基因組的發展一起建立起來的,所以至今為止生物信號平行分析最成功的形式是以一種尼龍膜為基質的“cDNA陣列”,用于檢測生物樣品中基因表達譜的改變。


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